萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒原理及樣本前處理

 1. 原理

萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺（Ractopamine，RAC），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的萊克多巴胺和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗萊克多巴胺抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

2.樣本前處理

2.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.2 配液：

配液1：復(fù)溶液

    將10×復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

2.3 樣本前處理步驟：

2.3.1 尿樣處理方法：

    直接取20µl清亮尿樣進(jìn)行測(cè)定（渾濁尿樣需要過(guò)濾或經(jīng)4000r/min離心5min，以得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

尿樣本稀釋倍數(shù)：1    檢測(cè)下限：0.1ppb

2.3.2 組織樣本處理方法一：

   稱取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml復(fù)溶液，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。取20µl上清液進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：4    檢測(cè)下限：0.4ppb

2.3.3 組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法二：

1）稱取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。

2）取上清液5ml，在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥；

▲肌肉樣本：

    加入1ml 復(fù)溶液混合振蕩30s，取20µl用于分析。

肌肉樣本稀釋倍數(shù)：1    檢測(cè)下限：0.1ppb

▲肝臟樣本：

    加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 去離子水混合振蕩30s，室溫4000r/min以上離心5min，去除上層；取50µl下層與50µl復(fù)溶液混勻；取20µl用于分析。

肝樣本稀釋倍數(shù)：2    檢測(cè)下限：0.2ppb

2.3.4 飼料樣本處理方法：

1）稱取均質(zhì)后的飼料樣品1.0±0.05g，加入10ml甲醇，再加入5g無(wú)水硫酸鈉，振蕩2min；室溫 4000r/min以上離心10min；

2）吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮?dú)獯蹈桑? ml復(fù)溶