呋喃妥因代謝物檢測(cè)試劑盒各類樣本的處理方法分析

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：0.36M亞硝基鐵qing化鉀溶液（牛奶、奶粉樣本）

11.9g亞硝基鐵qing化鉀加去離子水至100ml溶解。

配液2：1.04M硫酸鋅溶液（牛奶、奶粉樣本）

    29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。

配液3：0.1M  K₂HPO₄ 溶液

    稱11.4g K₂HPO_4?3H₂O加去離子水溶解定溶至500ml。

配液4：1M  HCL

    8.6mL濃HCL加去離子水定容至100mL。

配液5：1M  NaOH溶液

    稱取4g NaOH，加去離子水定容至100ml。

配液6：復(fù)溶液

    將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 牛奶樣本處理方法

1）取5ml樣本于離心管中，加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液（配液1）振蕩混合30秒，加250ul 硫酸鋅溶液（配液2）振蕩混合30秒，15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取上清1.1ml，加4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；

3）在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃（超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果）水浴孵育3小時(shí)；

4）分別加入5ml 0.1M K₂HPO₄ 溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯，振蕩5分鐘；

5）室溫下4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘；

6）取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中，50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

7）用1ml正已烷溶解殘留物，加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒；室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘；

8）去除上層正已烷，取50μl下層液用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)為2    檢測(cè)下限：0.04ppb

5.3.2 奶粉、蛋粉樣本處理方法

1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中，加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；

2）在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃（超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果）水浴孵育3小時(shí)；

3）加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液（配液1）振蕩混合30秒，加250ul 硫酸鋅溶液（配液2）振蕩混合30秒，15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

4）取全部上清到另一個(gè)離心管中，后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，4）”

5.3.3 蜂蜜、組織、腸衣、肝臟、飼料、雞蛋樣本處理方法

1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中，加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；

2）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，3）”

5.3.4 熟食樣本處理方法

1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于50ml離心管中，加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水，振蕩2min，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，去除全部液體；

2）加入5ml乙氰和5ml正己烷，振蕩2min，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，去除全部液體；

3）在沉淀中加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘；

    注：熟食的添加回收試驗(yàn)請(qǐng)?jiān)诖瞬郊尤敫邩?biāo)準(zhǔn)。

4）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，3）”