　　針對引起禽白血病的禽C型反錄病毒群的病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含禽C型反錄病毒群的病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

　　六、組成：

　　RT-PCR反應(yīng)液、混合酶液、陽性對照、陰性對照。

　　七、樣品DNA的制備

　　用自選方法提取Cps DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。

　　制備Cps標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。

　　1、標(biāo)記6個離心管，分別為6,5,4,3,2和1號。

　　2、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭，下同)

　　3、先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至0E7拷貝/μL)

　　4、在6號管中加入5μL10E7拷貝/uL的Cps陽性對照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照.

　　八、技術(shù)參數(shù)

　　1、符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1686-2005《新城疫病毒中強(qiáng)毒株檢測)法：熒光RT-PCR法》的檢測要求，可用于禽肉、禽類組織臟器禽類排泄和分泌物，及其泄殖腔和咽喉拭樣中新城疫病毒的檢測。

　　2、靈敏度：對于接種的雞胚尿囊液，檢測的zu高稀釋度可達(dá)0-8~10-7,與雞胚病毒分離方法的靈敏度接近。定量檢測線性范圍可達(dá)10-1010拷貝/ml。

　　3、特異性：采用新基因序列數(shù)據(jù)庫設(shè)計，并通過系統(tǒng)驗證新城疫病毒RT-PCR能夠檢測所有已知新城疫病毒毒株。對于其它禽類感染因子，本試劑盒檢測結(jié)果為陰性

　　4、產(chǎn)品盒組成：（不包括新城疫病毒RNA提取試劑，用戶可采用通用型病毒RNA提取試劑盒或試劑盒推薦的提取方法。)

　　組成成份(48T/kit)

　　1、RNA提取液30ml 1瓶

　　2、DEPC水5ml 1瓶

　　3、新城疫病毒RT-PCR一步法反應(yīng)液 920u|1管

　　4、逆轉(zhuǎn)錄酶(5U/ul)

　　5、使用說明書一份

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